考马斯亮蓝G250一定范围内与蛋白质浓度成正比,因此可用于蛋白质的定量测定。
考马斯亮蓝G250在游离状态下呈红色,zuì大光吸收在465nm;当它与蛋白质结合后变为青色,蛋白质-色素结合物在595nm波长下有zuì大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比。
考马斯亮蓝G250染色:
蛋白质与考马斯亮蓝G250结合在2min左右的时间内达到平衡,完成反应十分迅速;其结合物在室温下1h内保持稳定。该法是1976年Bradford建立,试剂配制简单,操作简便快捷,反应非常灵敏,灵敏度比Lowry法还高4倍,可测定微克级蛋白质含量,测定蛋白质浓度范围为0~1 000μg/mL,是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。
考马斯亮蓝有G-250和R-250两种。其中G-250由于与蛋白质的结合反应十分迅速,常用来作为蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝R-250与蛋白质反应虽然比较缓慢,但是可以被洗脱下去,所以可以用来对电泳条带染色。
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